在二期梅毒的粘膜斑、湿丘疹和扁平湿疣等病损内也容易找到梅毒螺旋体 。梅毒血清试验方法很多，所用抗原有非螺旋体抗原(心拟脂抗原)和梅毒螺旋体抗原两类 。过去常用粗制牛心心拟脂抗原做沉淀试验(卡恩氏试验，曾译康氏试验等)和补体结合试验(瓦瑟曼氏试验等) 。目前应用的性病研究室(VDRL)玻片试验则以纯心拟脂作抗原，其成分纯净，试验结果稳定 。以梅毒螺旋体作抗原的试验，国际上常用的有荧光螺旋体抗体吸收试验 (FTA-ABS)、苍白螺旋体血凝试验(TPHA)等，其特异性强，敏感度高 。梅毒血清试验对各期梅毒的诊断都很重要，早期梅毒常有强阳性反应 。潜伏梅毒和无症状神经梅毒因无活动的临床症状，主要靠梅毒血清试验诊断，但应注意梅毒血清试验可以出现假阳性反应，一些非梅毒的疾病，如疟疾、系统性红斑狼疮等可出现阳性反应，称为生物学假阳性反应 。在下疳的早期，梅毒血清反应常为阴性，晚期梅毒中也可阴性，特别是在晚期神经梅毒的脊髓痨患者阴性率可达30～50% 。
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